熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案

熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案無Ct值或Ct值延遲出現(xiàn):擴增曲線信號不佳，曲線不平滑:標準曲線線性差。1.擴增產(chǎn)物大小不合適：實時熒光定量PCR擴增片段的長度通常在80-150bp之間，如果調(diào)整反應(yīng)的時間有可能擴增500bp的片段。2.PCR反應(yīng)過程中退火及延伸的時間過短或過長：應(yīng)根據(jù)擴增片段的大小予與調(diào)整。3.MgCl,濃度不合適：按0.5mm的間距調(diào)整MgCI2的濃度。4.循環(huán)數(shù)設(shè)置不足：最少設(shè)置35個循環(huán)，可以增加到45個循環(huán)。超過45個循環(huán)以上背景信號會增...

查看更多

消毒和滅菌的區(qū)別

微生物行業(yè)及微生物實驗室經(jīng)常會用到消毒、滅菌和清潔那么清潔、消毒和滅菌的區(qū)別是什么呢？滅菌滅菌的定義是破壞或消除所有形式的微生物生命的過程，并通過物理或化學(xué)方法在設(shè)施中進行。加壓蒸汽、干熱、EtO氣體、過氧化氫氣體等離子體和液體化學(xué)品是醫(yī)學(xué)環(huán)境設(shè)施中使用的主要消毒劑。其實滅菌和消毒是有區(qū)別的，一些衛(wèi)生專業(yè)人員以及技術(shù)和商業(yè)文獻將“消毒”稱為“滅菌”，將物品稱為“部分無菌”。當化學(xué)品被用來破壞所有形式的微生物生命時，它們可以被稱為化學(xué)消毒劑。這些用于較短暴露時間的相同殺菌劑也可...

查看更多

季銨鹽類消毒劑是什么

季銨鹽類消毒劑是什么？季銨化合物廣泛用作消毒劑。季銨鹽是較好的清潔劑，但高硬度的水和棉和紗布墊等材料會使它們的殺菌性降低，因為不溶性沉淀物或棉布和紗布墊分別吸收了活性成分。季銨化合物與其他幾種消毒劑（例如酚類物質(zhì)、碘伏）一樣，革蘭氏陰性菌可以在其中存活或生長。季銨化合物消毒劑的化學(xué)性質(zhì)在化學(xué)上，季銨鹽是有機取代的銨化合物，其中氮原子的化合價為5，其中四個取代基(R1-R4)是給定大小或鏈長的烷基或雜環(huán)基，第五個(X-)是鹵化物、硫酸鹽或類似的自由基.每種化合物都表現(xiàn)出自己的抗...

查看更多

過氧化氫消毒液的應(yīng)用

過氧化氫消毒液的消毒原理：過氧化氫的作用是產(chǎn)生破壞性的羥基自由基，這些自由基可以攻擊膜脂、DNA和其他基本細胞成分。由具有細胞色素系統(tǒng)的需氧生物和兼性厭氧菌產(chǎn)生的過氧化氫酶可以通過將過氧化氫降解為水和氧氣來保護細胞免受代謝產(chǎn)生的過氧化氫的影響。過氧化氫消毒液的滅菌活性：過氧化氫對多種微生物具有活性，包括細菌、酵母菌、真菌、病毒和孢子。0.5%的加速過氧化氫在1分鐘內(nèi)表現(xiàn)出殺菌和殺病毒活性，在5分鐘內(nèi)表現(xiàn)出殺分枝桿菌和殺真菌活性。尿液中過氧化氫的殺菌效果和穩(wěn)定性已被證明可對抗多...

查看更多

細胞傳代的步驟-貼壁細胞傳代培養(yǎng)步驟

傳代培養(yǎng)是細胞培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一，也是幾乎所有細胞生物學(xué)實驗的基礎(chǔ)。當細胞在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋，分種成多瓶，細胞才能繼續(xù)生長。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行，每一步都需要認真仔細的無菌操作。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。本實驗以傳代大鼠骨髓充間質(zhì)干細胞為例進行細胞傳代的步驟做一介紹。一、傳代前準備實驗開始前，將無菌培養(yǎng)瓶、15ml離心管、移液管、槍頭等放入無菌超凈工作臺，紫外線照射30mi...

查看更多